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对大多数细胞来而言,每1μgdna使用3.0μlpeimax转染试剂都能获得较高转染效率。使用者也可尝试每1μgdna使用1.5~4μl体积线性peimax转染试剂进行优化。.peimax(mw40,000)为polysciences公司生产的化合物产品,每批产品出厂前都经过严格的检测,保证每批产品都100%合格、稳定且品质高,但由于作为转染试剂使用过程中有很多实验室因素(配置方法,ph,水纯度,称量的准度,dnarna纯度,细胞状态,细胞品系…)造成溶解出现问题或者转染效率出现差异,所以厂家只受理该产品纯度,分子量及重量缺失破损等相关投诉,针对极个别客户溶解问题和转染效率问题我们能友善解决。更多关于pei转染试剂相关产品问题,欢迎咨询上海曼博生物!浙江高性价比pei转染试剂哪里有卖gmp等级的pei转染试剂?

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瞬时转染方法:1.接种细胞:转染前一晚,用胶原酶(worthingtong公司ls004196)消化细胞并计数(不建议用胰酶)。调整细胞浓度,将细胞铺入细胞培养的器皿,每个孔置入的细胞量应能使转染时细胞汇合度达到70~80%。2.准备dna-pei复合物:dna、pei试剂和稀释剂在进行以下步骤前需先使其升至室温。,用opti-memitm(invitrogen)或其他适合的无蛋白培养基稀释适量dna。用同样的培养基稀释pei试剂。每1μgdna需用1.5-5μl线性pei转染试剂。一边轻轻涡旋装有dna溶液的试管,一边将稀释的线性pei转染试剂滴加至试管中(注意:请勿颠倒添加顺序)。充分混匀后,室温静置10~25min以形成dna-pei复合物。当溶液体积较大时,请用圆底聚丙烯管,例如nest5ml/14ml离心管。3.转染细胞:直接向每个孔中加入dna-pei复合物并轻轻涡旋培养板/培养皿。在无血清条件下转染时,去除生长培养基,替换成无血清培养基,然后滴dna-pei复合物。转染1.5h后,添加½体积的包含30%血清的生长培养基。4.孵育细胞和分析结果:在co2培养箱中37℃下孵育细胞至可以分析检测。转染后5h即可检测到转入基因的表达。请自行确定适合检测时间。

线性pei转染试剂是一种阳离子聚合物,分子量25000,它能与核酸形成复合物,并使该复合物进入哺乳动物细胞。线性pei转染试剂广适用于常见细胞系,如hek-293、hek293t、hepg2、hela、cho-k1、cos-1、cos-7、nih/3t3和sf9等。该试剂即使在有血清存在的情况下,它仍然能的将核酸导入细胞。78bio公司提供的线性pei转染试剂具有如下优点:优越的转染效率,重组蛋白的高表达水平,与含血清的培养基相兼容,低细胞毒性,易于操作?质量控制每批次线性pei转染试剂均经过转染测试。将egfp表达质粒(genecopoeiacat.no.ex-egfp-lv01)用endofectintm-plus转染试剂转入亚融合状态的hek-293细胞,转染16h后,超过95%的细胞表达egfp。更多关于pei转染试剂相关的产品信息,欢迎咨询上海曼博生物!用pei转染试剂时出现沉淀是什么原因?

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注意事项质粒质量:请务必使用高质量转染级无内质粒(推荐使用qiagen或者mn公司去内质粒提取试剂盒)。通过260nm光吸收测定dna浓度,260nm/280nm比值确定dna纯度(比值应该在1.8~2.0的范围之内)。如有可能,请通过琼脂糖凝胶电泳检测质粒的完整性。细胞条件:使用适当保存和经常传代的健康细胞。确保培养基没有被细菌、或支原体污染。如果细胞是近期复苏的液氮冻存细胞,请在转染前至少传代两次。建议使用gibco或者78bio公司血清培养细胞。pei转染试剂对复合物孵化的时间是有要求的,一般建议5~20分钟之间。国产pei转染试剂好用么

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稳定转染方法:

1.接种细胞:转染前,用胶原酶(worthingtong公司ls004196)消化细胞并计数(不建议用胰酶)。调整细胞浓度,将细胞铺入细胞培养的器皿,每个孔置入的细胞量应能使转染时细胞汇合度达到70~80%。

2.准备dna-pei复合物:dna、pei试剂和稀释剂在进行以下步骤前需先使其升至室温。依据表1所示,用opti-memitm(invitrogen)或其他适合的无蛋白培养基稀释适量dna。用同样的培养基稀释pei试剂。每1μgdna需用1.5-5μl线性pei转染试剂(这个需要客户自行摸索配比,每一批转染试剂和每一批dna比例可能会稍有不同)。一边轻轻涡旋装有dna溶液的试管,一边将稀释的线性pei转染试剂滴加至试管中(注意:请勿颠倒添加顺序)。充分混匀后,室温静置10~25min以形成dna-pei复合物。当溶液体积较大时,请用圆底聚丙烯管,例如nest5ml/14ml离心管。

3.转染细胞:直接向每个孔中加入dna-pei复合物并轻轻涡旋培养板/培养皿。在无血清条件下转染时,去除生长培养基,替换成无血清培养基,然后滴dna-pei复合物。转染1.5h后,添加½体积的包含30%血清的生长培养基。

4.孵育细胞和分析结果:在co2培养箱中37℃下孵育细胞至可以分析检测。转染后5h即可检测到转入基因的表达。

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